电视动画《少女爱上姐姐》改编自Caramel Box于2005年发售的十八禁恋爱喜剧冒险游戏《处女爱上姐姐（処女はお姉さまに恋してる）》（全年龄版称为《少女爱上姐姐》）。动画的标题采用了全年龄的PS2版《少女爱上姐姐》。故事的主角——镝木财阀的独生子，长相清秀，成绩出众却有点弱气的的“好青年”宫小路瑞穗，因听从祖父的遗愿，被强迫送入一所女子学园就学，为了避免很多不必要的麻烦（或者是为了制造更多麻烦？），在青梅竹马的真里野的强烈要求下，他被迫换上了女装，在一群姐姐妹妹当中开始了“幸福”的校园生活，还误打误撞地被选为了全校学生所憧憬的“大姐样”。在小姐云集的女学园中引发轩然大波的瑞穗同学的未来会怎么样呢？